Date of Award

3-2019

Document Type

Thesis

Degree Name

Doctor of Philosophy (PhD)

Department

Medical Education

First Advisor

Haider Raza

Second Advisor

Samir Attoub

Third Advisor

Md Emdadul Haque

Abstract

Hyperglycaemia and hyperlipidaemia are the main causes of diabetes and obesity-associated complications. Increased oxidative stress, inflammatory responses and altered energy metabolism have been associated with hyperglycaemia and hyperlipidaemia. The concept of ‘glucolipotoxicity’ has arisen from the combination of the deleterious effects of the chronic elevation of levels of glucose and fatty acids on pancreatic β-cells’ function and/or survival. The synergistic effect of both nutrients exacerbates β-cells’ dysfunction over time and creates a vicious cycle of impaired insulin secretion and metabolic disturbances. Though numerous studies have been conducted in this field, the exact molecular mechanisms and causative factors still need to be established. The aim of the present work is to elucidate the molecular mechanisms of altered cell signalling, oxidative and metabolic stress, and inflammatory/antioxidant responses in the presence of high concentrations of glucose/fatty acids in a cell-culture system using an insulin-secreting pancreatic β- cell line (Rin-5F) and to study the effect of the antioxidant N-acetylcysteine (NAC) on β-cell toxicity. In our study, we investigated the molecular mechanism of cytotoxicity due to high glucose concentration (up to 25mM) and high saturated fatty acid concentration (up to 0.3mM palmitic acid) on Rin-5F cells. In this regard, initially, we investigated the effects of streptozotocin (STZ), a known β-cell toxin that is structurally related to glucose, to identify specific molecular and metabolic targets affected in pancreatic β-cells. Furthermore, we aim to elucidate the cytoprotective effects of NAC on β-cell toxicity induced by STZ/high glucose/high palmitic acid.

Our results show that the cellular and molecular mechanisms of β-cell toxicity are mediated by increased oxidative stress, imbalance of redox homeostasis, disruption of mitochondrial bioenergetics and alterations in cell signalling. On the other hand, NAC treatment attenuates β-cell cytotoxicity, apoptosis and mitochondrial damage associated with oxidative stress. The use of an in-vitro cell-culture model in this study suggests the cellular and molecular mechanism(s) of β-cell toxicity without the involvement of multiple physiological factors that would be seen in vivo, which might contribute to the disease progression.

Comments

ارتفاع نسبة السكر و الدهون في الدم هي من الأسباب الرئيسية لمرض السكري والسمنة و مضاعافاتها. وقد ارتبطت زيادة الإجهاد التأكسدي، الاستجابات الالتهابية وتغير الطاقة الأيضية مع ارتفاع السكر و الدهون في الدم. نشأ مفهوم "Glucolipotoxicity" من الجمع بين الآثار الضارة للارتفاع المزمن لمستويات الجلوكوز والدهون في وظائف خلايا البيتا في البنكرياس. ويزيد التأثير للمغذيات من ضعف خلايا البيتا مع مرور الوقت ويخلق حلقة مفرغة من قلة إفراز الأنسولين و الاضطرابات الاستقلابية. على الرغم من إجراء العديد من الدراسات في هذا المجال، لكن لا تزال هناك حاجة إلى تحديد الآليات الجزيئية الدقيقة والعوامل المسببة. الهدف من هذا العمل هو توضيح الآليات الجزيئية للإشارات الخلوية، والإجهاد التأكسدي و الاستقلابي، و الاستجابات الالتهابية/المضادة للأك التي تفرز الأنسولين و دراسة تأثير مضادات الأكسدة،سدة في وجود نسبة مرتفعة من الجلوكوز/الأحماض الدهنية في أنظمة زراعة الأنسجة الخلوية و ذلك باستخدام خلايا البنكرياس (Rin-5F) -acetylcystein (NAC) - N على سمية الخلايا. في دراستنا، قمنا بالتحري عن الآلية الجزيئية لارتفاع الجلوكوز )تصل إلى (25mM و زيادة الأحماض الدهنية المشبعة )تصل إلى 0.3mM ,حمض بالمتيك( التي تؤدي الى السمية الخلوية لخلايا .Rin-5F في هذا الصدد، قمنا في بادئ الأمر بالتحري عن تأثيرات الستربتوزوتوسين , (STZ) وهو قاتل لخلايا البيتا في البنكرياس و يرتبط ارتباطًا هيكليًا بالجلوكوز, لتحديد الاقسام الجزيئية والايضية المتضررة في خلايا البيتا في البنكرياس. بالاضافة إلى ذلك سيتم التحقق من آلية الآثار الوقائية لمضادة الاكسدة acetylcystein (NAC) - N لتوضيح آلية الحماية الخلوية في خلايا البيتا في البنكرياس.

أظهرت نتائجنا أن الآليات الخلوية والجزيئية لسمية خلايا البيتا تنتج من زيادة الإجهاد التأكسدي، اختلال توازن NAC من تسمم الخلايا البيتا، وموت الخلايا المبرمج والأكسدة المرتبطة بأضرار الميتوكوندريا.

ان استخدام نموذج زراعة الخلايا في المختبر في هذه الدراسة يبرز الآلية الخلوية والجزيئية لسمية خلايا البيتا دون تدخل العوامل الفيزيولوجية المتعددة في الجسم الحي، والتي قد تسهم في تطور المرض.

Download

Share

COinS